Предание об Успении Богоматери восходит к древним апокрифическим текстам, наиболее известным из которых считается «Слово Иоанна Богослова», составленное не ранее V века. В центре композиции — ложе с усопшей Богоматерью в синем хитоне и темно-вишневом мафории. За ложем изображен Иисус Христос, держащий на левой руке душу Богоматери в образе спеленутой фигуры младенца, его правая рука в жесте благословения вытянута в сторону Марии. Икону отличает необычная форма двойной славы. Фигуру самого Христа окружает миндалевидная слава ярко-красного цвета. Слава-мандорла появляется в сценах Успения не раньше конца XII века.

Вокруг ложа — двенадцать скорбящих апостолов, два святителя с Евангелиями в руках. Иконописцу удалось передать их эмоции: глубокую земную печаль, которая контрастирует с Божественным светом, окружающим Спасителя. В нижней части иконы у ложа представлен ангел с мечом и иудейский священник Авфоний.

В XV веке на Руси широко распространились иконы Успения с изображением чуда отсечения рук ангелом у нечестивого иудея Авфонии (Афонии, в некоторых источниках — Иефонии), который представлен на переднем плане, перед одром. По преданию, Авфония побежал к погребальной процессии, чтобы сбросить тело Богоматери с одра, и ангел отрубил ему за эту попытку руки. Возможно, популярность сюжета в то время и в XVI столетии была связана с борьбой против еретических движений. Впервые же этот сюжет зафиксирован на фреске церкви Панагии Мавриотиссы в Кастории (рубеж XII–XIII веков), а в древнерусском искусстве — на фресках Снетогорского монастыря и церкви Успения на Волотовом поле.

Палаты на втором плане иконы указывают на то, что действие происходит в доме Богоматери на Сионской горе в Иерусалиме, там же, где произошло сошествие Святого Духа на апостолов. Изображение палат получило широкое распространение с начала XII века, но особенно часто встречается в живописи XIII века. К характерным особенностям этого иконографического Успения можно отнести то, что у апостолов отсутствуют нимбы и нет сцены передачи души Богоматери слетающимся ко Христу ангелам.